フォンウィレブランド因子に特異的なヒト化抗体

专利摘要:
本発明は、ヒトフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント、ｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための方法を含む、それらの製造方法及び使用に関する。
公开号:JP2011510622A
申请号:JP2010543586
申请日:2009-01-22
公开日:2011-04-07
发明作者:ラザライヅ エライアス；ウッヅ キャサリン；ホー サムエル；ファン シャオミン；ブレイン スタニスラス；モトル ハロルド；ベルトシンガー マーティン
申请人:グレンマーク ファーマシューティカルズ エスアーＧｌｅｎｍａｒｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｓ．Ａ．；
IPC主号:C12N15-09

专利说明:

[0001] 本発明は、全体として、フォンウィルブランド因子に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントに関する。より詳細には、本発明は、全体として、マウス抗体ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲに対応するＣＤＲを含むフォンウィルブランド因子に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント等の、フォンウィルブランド因子に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントに関する。]
背景技術

[0002] 血管障害部位への血小板付着の制御は複数のタンパク質の十分に調整された相互作用を含み、止血及び血栓症の両方において重要な役割を果たす。血小板付着を生じさせるタンパク質の１つはフォンウィルブランド因子（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ（ｖＷＦ））である。ｖＷＦは血漿に存在する大きな多量体糖タンパク質である。ｖＷＦは、Ａ１ドメインを介して血小板受容体ＧＰＩｂαと相互作用し、血小板の回転及び付着を促進するとされている（Ｍｏａｋｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７８：１４５６−６１）。血小板の回転及び付着に続いて血小板／フィブリン栓子が形成され、出血が止まる。しかしながら、過度の血小板及び／又は凝集応答によって病理学的な血栓症状が生じ得る。]
[0003] 血小板活性化（例えば、ＧＰＩＩｂＩＩＩａ、ＡＤＰ受容体、シクロオキシゲナーゼ又はホスホジエステラーゼアンタゴニスト）又は凝集（例えば、トロンビン及び第Ｘａ因子阻害剤）を抑制する現在の療法が出血性合併症をもたらすとすれば、止血を有意に損なうことなく、血栓症を実質的に抑制することができる物質の開発が求められる。]
[0004] 本発明は、全体として、ヒトフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント、ｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための方法を含む、それらの製造方法及び使用に関する。ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、非ヒト抗体（例えば、マウスＣＤＲ）からの相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒトフレームワーク領域を含むことができる。]
[0005] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0006] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３７で示される重鎖配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８で示される軽鎖配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0007] 本発明は、（ａ）マウス抗体ＮＭＣ−４の重鎖及び軽鎖可変領域（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１及び２）に存在するＣＤＲに対応する重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、（ｂ）抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）等のＶＨ４−５９由来ヒト抗体の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域及び／又はヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＶＬ０１８）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0008] 本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及び／又はＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の１以上を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0009] また、本発明は、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からの重鎖フレームワーク領域をさらに含むことができる。]
[0010] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及び／又はＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）の１以上を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0011] 本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域をさらに含むことができる。]
[0012] また、本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）と、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域及び／又はヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からの重鎖フレームワーク領域をさらに含むことができる。]
[0013] 本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、Ｈ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）の１以上を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0014] 本発明は、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）の１以上を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0015] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、Ｈ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）の１以上と、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）の１以上と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0016] 例えば、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）；Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）；Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）及びＨ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）を含むことができる。]
[0017] また、本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及び／又はＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の１以上と、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及び／又はＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）の１以上と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域及び／又はヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からの重鎖フレームワーク領域をさらに含むことができる。]
[0018] また、本発明は、１０ｎＭ以下、好ましくは５ｎＭ以下、より好ましくは１ｎＭ以下、最も好ましくは少なくとも約０．２ｎＭ〜約０．４ｎＭの親和性（Ｋｄ）でｖＷＦに結合する、本願明細書に記載するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。また、本発明は、１００ｎＭ以下、好ましくは５０ｎＭ以下、より好ましくは１０ｎＭ以下、最も好ましくは少なくとも約０．２ｎＭ〜約５．０ｎＭの親和性（Ｋｉ）でｖＷＦへの結合に競合する、本願明細書に記載するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0019] また、本発明は、１０ｎＭ以下、好ましくは５ｎＭ以下、より好ましくは１ｎＭ以下、最も好ましくは少なくとも約０．２ｎＭ〜約０．４ｎＭの親和性（Ｋｄ）でｖＷＦのＡ１ドメインに結合する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。また、本発明は、１００ｎＭ以下、好ましくは５０ｎＭ以下、より好ましくは１０ｎＭ以下、最も好ましくは少なくとも約０．２ｎＭ〜約５．０ｎＭの親和性（Ｋｉ）でｖＷＦのＡ１ドメインへの結合に競合する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0020] また、本発明は、６５℃を超えるＦＡＢフラグメント耐熱温度を有する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0021] 本発明は、ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ；ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２（ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３（ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３（ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）を含み、ＬＣＤＲ１及び／又はＬＣＤＲ２の少なくとも１つがそれぞれＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）又はＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）ではない、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0022] また、本発明は、ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ；ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２（ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３（ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１（ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２（ＹＴＳＳＬＨＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３（ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と、ヒト抗体生殖細胞ファミリーＶＨ４の重鎖フレームワーク領域１、２、３に対応するフレームワーク領域１、２、３と、ヒト抗体生殖細胞ファミリーＶＫ１の軽鎖フレームワーク領域１、２、３に対応するフレームワーク領域１、２、３と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0023] また、本発明は、全体として、本願明細書に開示するヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体をコードする単離核酸（ｉｓｏｌａｔｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）に関する。いくつかの実施形態では、ベクターは本願明細書に開示する核酸を含むことができる。別の実施形態では、宿主細胞は本願明細書に開示する核酸を含むことができる。]
[0024] また、本発明は、全体として、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体の製造方法であって、本願明細書に開示する宿主細胞を培養して核酸を発現させ、前記抗体を製造することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、前記方法は、宿主細胞培養物から抗体を回収することをさらに含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞培地から抗体を回収する。いくつかの実施形態では、宿主細胞を培養する前に、重鎖可変領域をコードする核酸を含むベクター及び軽鎖可変領域をコードする核酸を含むベクターによる宿主細胞に対する共トランスフェクションを行う。]
[0025] 本発明は、全体として、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体と、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物に関する。]
[0026] また、本発明は、本願明細書に開示する第１のヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、ｖＷＦのＡ１ドメインに結合する第２の抗体と、を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、第２の抗体はＡＪＷ−２００である。]
[0027] また、本発明は、全体として、被投与者における（例えば、患者）ｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量のｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はそのフラグメントを前記被投与者に投与する方法に関する。いくつかの実施形態では、被投与者はヒトである。いくつかの実施形態では、治療有効量は、血小板凝集を抑制するために十分な量であり、出血の有意な臨床的徴候を引き起こすには不十分な量である。]
[0028] また、本発明は、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントの薬剤としての使用を提供する。また、本発明は、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントの、ｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための薬剤の調製における使用を提供する。いくつかの実施形態では、治療有効量は、血小板凝集を抑制するために十分な量であり、出血の有意な臨床的徴候を引き起こすには不十分な量である。]
[0029] いくつかの実施形態では、ｖＷＦ媒介疾患又は障害は、血栓症又は血栓疾患である。いくつかの実施形態では、血栓疾患は、心臓血管疾患又は虚血性脳卒中等の脳血管疾患である。いくつかの実施形態では、心臓血管疾患は、アテローム性動脈硬化、再狭窄、口峡炎、急性心筋梗塞、急性冠症候群又は糖尿病に伴う心臓血管疾患である。いくつかの実施形態では、血栓症又は血栓疾患は、血管炎症、静脈血栓症、鎌状赤血球病、異種移植拒絶反応、末梢血管疾患、血栓性血小板減少性紫斑症、嚢胞性繊維症、血管性認知症、レイノー病、関節リウマチ又は糖尿病である。いくつかの実施形態では、脳血管疾患は、血管性認知症、虚血性脳卒中又は再発性脳卒中の予防である。]
[0030] いくつかの実施形態では、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントは作動因子機能を有していない。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＩｇＧ４に由来するＦｃ領域を含む。]
[0031] いくつかの実施形態では、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントはフォンウィルブランド因子のＡ１ドメインに結合する。]
[0032] いくつかの実施形態では、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２又は二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）である。]
[0033] いくつかの実施形態では、ｖＷＦに特異的な結合性フラグメントはＦａｂではない。]
[0034] いくつかの実施形態では、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体は完全抗体（ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ａｎｔｉｂｏｄｙ）である。]
[0035] いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＨＣＤＲ１に１以上の置換、例えば、Ｆ２７Ｇ、Ｌ２９Ｉ、Ｔ３０Ｓ及び／又はＶ３４Ｗ置換を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＨＣＤＲ２に１以上の置換、例えば、Ｓ６１Ｐ及び／又はＡ６２Ｓ置換を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＬＣＤＲ１に１以上の置換、例えば、Ｓ２４Ｑ、Ｎ３０Ｓ及び／又はＫ３１Ｎ置換を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＬＣＤＲ２に１以上の置換、例えば、Ｙ５０Ｄ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５３Ｎ、Ｈ５５Ｅ及び／又はＳ５６Ｔ置換を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＨＣＤＲ１に１以上の置換、例えば、Ｆ２７Ｇ、Ｌ２９Ｉ、Ｔ３０Ｓ及び／又はＶ３４Ｗ置換を含み、ＨＣＤＲ２に１以上の置換、例えば、Ｓ６１Ｐ及び／又はＡ６２Ｓ置換を含み、ＬＣＤＲ１に１以上の置換、例えば、Ｓ２４Ｑ、Ｎ３０Ｓ及び／又はＫ３１Ｎ置換を含み、ＬＣＤＲ２に１以上の置換、例えば、Ｙ５０Ｄ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５３Ｎ、Ｈ５５Ｅ及び／又はＳ５６Ｔ置換を含むことができる。]
図面の簡単な説明

[0036] リストセチン誘発ｖＷＦ媒介血小板凝集反応検定における、原型のＮＭＣ−４モノクローナル抗体及び異なる抗ｖＷＦ抗体であるＡＪＷ２００と比較した場合のＮＭＣ−４キメラ抗体の阻害活性を示す。
非標識ＮＭＣ−４キメラ抗体（相同競合）並びにＡＪＷ２００単独および結合の、Ｅｕ−標識ＮＭＣ−４との結合における競合を示す。非標識ＮＭＣ−４モノクローナル抗体、アイソタイプ対照ＩｇＧ、ＡＪＷ２００及び可変領域Ｈ９及びＬ９を有するＮＭＣ−４抗体のヒト化誘導体による、Ｅｕ−標識ＮＭＣ−４キメラ抗体との結合における競合を示す。
２０ｎＭ ＡＪＷ２００の存在下及び非存在下におけるＮＭＣ−４競合のＨｉｌｌプロットを示す。
せん断流動条件において内皮ｖＷＦへの血小板付着を妨げるＮＭＣ−４の能力を示す（ＨＵＶＥＣ細胞に付着する血小板の顕微鏡写真を含む）。ＨＵＶＥＣ細胞単層は、ＰＢＳで処理した。抗体は単層からの注入直前に対応する血小板懸濁液に添加した。
せん断流動条件において内皮ｖＷＦへの血小板付着を妨げるＮＭＣ−４の能力を示す（ＨＵＶＥＣ細胞に付着する血小板の顕微鏡写真を含む）。ＨＵＶＥＣ細胞単層は、２５μＭヒスタミンで処理した。抗体は単層からの注入直前に対応する血小板懸濁液に添加した。
せん断流動条件において内皮ｖＷＦへの血小板付着を妨げるＮＭＣ−４の能力を示す（ＨＵＶＥＣ細胞に付着する血小板の顕微鏡写真を含む）。ＨＵＶＥＣ細胞単層は、２５μＭヒスタミンと、１０μｇ／ｍＬの抗ｖＷＦ抗体（ＮＭＣ−４）で処理した。抗体は単層からの注入直前に対応する血小板懸濁液に添加した。
せん断流動条件において内皮ｖＷＦへの血小板付着を妨げるＮＭＣ−４の能力を示す（ＨＵＶＥＣ細胞に付着する血小板の顕微鏡写真を含む）。ＨＵＶＥＣ細胞単層は、２５μＭヒスタミンと、１８μｇ／ｍＬの抗ＧＰＩｂα抗体（ＡＫ２）で処理した。抗体は単層からの注入直前に対応する血小板懸濁液に添加した。
せん断流動条件において内皮ｖＷＦへの血小板付着を妨げるＮＭＣ−４の能力を示す（ＨＵＶＥＣ細胞に付着する血小板の顕微鏡写真を含む）。ＨＵＶＥＣ細胞単層は、２５μＭヒスタミンと、１８μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧで処理した。抗体は単層からの注入直前に対応する血小板懸濁液に添加した。
動脈血栓のラット塩化第二鉄モデルにおける、ＡＪＷ２００（図４Ｃ）と比較した場合の、ＮＭＣ−４キメラの活性を示す。抗体は用量反応研究で比較した。
動脈血栓のラット塩化第二鉄モデルにおける、ＡＪＷ２００（図４Ｃ）と比較した場合の、可変領域Ｈ１４及びＬ１０を有するヒト化抗体（図４Ｂ）の活性を示す。抗体は用量反応研究で比較した。
動脈血栓のラット塩化第二鉄モデルにおける、ＡＪＷ２００（図４Ｃ）の活性を示す。抗体は用量反応研究で比較した。
ヒヒにおける周期的血流減少（ＣＦＲ）に対するＧＢＲ６００の漸増投与量（０．０３〜１０ｍｇ／ｋｇ）の作用を示す。
ヒヒにおけるＣＦＲに対するＧＢＲ６００の漸増投与量（０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ）の作用を示す。
ヒヒにおけるＣＦＲに対するＧＢＲ６００の累積投与量（０．００５〜０．０７ｍｇ／ｋｇ）の作用を示す。
ヒヒにおけるＣＦＲに対するＧＢＲ６００の累積投与量の作用を示す。
ヒヒにおけるクロピドグレルの漸増投与量（１〜１０ｍｇ／ｋｇ）の作用を示す。
切開出血試験におけるＧＢＲ６００及びクロピドグレルの漸増投与量による点滴の作用の比較を示す。投与量は有効投与量の倍数として示す（例えば、ＣＦＲがゼロに減少する累積投与量）。
示差走査熱量法によるヒト化ＮＭＣ−４変異体の耐熱性を示す。] 図４Ｂ 図４Ｃ
[0037] 本発明は、ヒトフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント、例えば、マウス抗体ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲ又はＣＤＲの一部の１以上に対応するＣＤＲ領域を含むヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。ＮＭＣ−４抗体は、ＶＷＦのＡ１ドメインのＧＰ１Ｂ−α結合部位に結合する（例えば、Ｆｕｊｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，７７：１１３−２０，１９９１；Ｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｎａｒａ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ．，３６：６６２，１９８５を参照）。本発明のヒト化抗体は、修飾又は未修飾ヒトフレームワーク領域、例えば、ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：４）の可変領域のフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域のフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域をさらに含むことができる。マウスＮＭＣ−４の重鎖及び軽鎖領域が属するサブファミリーに高い相同性を示すヒトフレームワーク領域を含む様々なヒトフレームワーク領域は、ＮＭＣ−４ ＣＤＲの潜在的な受容体分子であると考えられていた。予期せぬことに、その他の変更（例えば、ヒトフレームワーク残基をマウス残基に変異させる）を加えることなく、選択された重鎖可変領域ヒトフレームワークの１つ及び選択された軽鎖可変領域ヒトフレームワークの１つにＮＭＣ−４ ＣＤＲを移植することにより、ｖＷＦ媒介血小板応答を阻害する際のヒト化抗体の力価を維持することができることが見出された。]
[0038] 「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を含む。]
[0039] 「ヒト化抗体」という用語は、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含む。ヒトフレームワーク配列及び別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列においてフレームワーク領域がさらに修飾されていてもよい。]
[0040] 「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。抗体が定常領域を含む場合には、定常領域もヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、生体外ランダム又は部位特異的突然変異又は生体内体細胞突然変異によって生体内に導入された突然変異）を含むことができる。ただし、本願明細書において使用する「ヒト抗体」という用語は、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含まない。]
[0041] 本願明細書において、ヒト抗体は、抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子を使用する方法によって得られる場合には、特定の生殖系列配列に由来する重鎖又は軽鎖可変領域を含む。そのような方法は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有する遺伝子導入マウスを抗原で免疫するか、ファージ提示ヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーを抗原でスクリーニングすることを含む。ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来するヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、ヒト抗体の配列と最も近い（最も高い％相同性を有する）配列を有するヒト生殖系列免疫グロブリン配列を選択することによって同定することができる。特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来するヒト抗体は、例えば、天然の体細胞突然変異又は部位特定的突然変異の意図的な導入による、生殖系列配列とのアミノ酸の相違を含んでいてもよい。ただし、選択するヒト抗体又はそのフラグメントは、通常は、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされたアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有し、他の種（例えば、マウス生殖系列配列）の生殖系列免疫グロブリンアミノ酸配列と比較した場合にヒト抗体をヒトに由来するものとして特定するアミノ酸残基を含む。ヒト抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされたアミノ酸配列と少なくとも９０％あるいは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）同一のアミノ酸配列を有していてもよい。]
[0042] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント（例えば、Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆａｂ’−ＳＨ，Ｆｖ，ｓｃＦｖ，Ｆ（ａｂ’）２，二重特異性抗体又は単一鎖抗体）を提供する。また、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７で示される重鎖配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８で示される軽鎖配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0043] また、本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及び／又はＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の１以上と、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及び／又はＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）の１以上と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0044] また、本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及び／又はＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の１以上又は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及び／又はＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）の１以上と、を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0045] 本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）と、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0046] 本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）又は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0047] いくつかの実施形態では、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは重鎖可変領域フレームワーク領域を含むことができ、フレームワーク領域は、ヒトＶＨ４ファミリーからの抗体に存在する１以上（例えば、１、２、３及び／又は４）の重鎖フレームワーク配列（例えば、フレームワーク１（ＦＷ１）、フレームワーク２（ＦＷ２）、フレームワーク３（ＦＷ３）及び／又はフレームワーク４（ＦＷ４））を含む。]
[0048] いくつかの実施形態では、ヒト化抗体又は結合性フラグメントは軽鎖可変領域フレームワーク領域を含むことができ、フレームワーク領域は、ヒトＶＫ１ファミリーからの抗体に存在する１以上（例えば、１、２、３及び／又は４）の軽鎖フレームワーク配列（例えば、フレームワーク１（ＦＷ１）、フレームワーク２（ＦＷ２）、フレームワーク３（ＦＷ３）及び／又はフレームワーク４（ＦＷ４））を含む。]
[0049] いくつかの実施形態では、ヒト化抗体又は結合性フラグメントはヒトＶＨ４ファミリーからの抗体に存在する１以上（例えば、１、２、３及び／又は４）の重鎖フレームワーク配列（例えば、フレームワーク１（ＦＷ１）、フレームワーク２（ＦＷ２）、フレームワーク３（ＦＷ３）及び／又はフレームワーク４（ＦＷ４））と、ヒトＶＫ１ファミリーからの抗体に存在する１以上（例えば、１、２、３及び／又は４）の軽鎖フレームワーク配列（例えば、フレームワーク１（ＦＷ１）、フレームワーク２（ＦＷ２）、フレームワーク３（ＦＷ３）及び／又はフレームワーク４（ＦＷ４））と、を含むことができる。]
[0050] ＶＨ４ファミリーのメンバー及びそれらの重鎖フレームワーク領域１、２、３としては、４−０４（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１４７，１４８及び１４９）、４−２８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５０，１５１及び１５２），４−３０．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３，１５４及び１５５）、４−３０．２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６，１５７及び１５８）、４−３０．４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９，１６０及び１６１）、４−３１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２，１６３及び１６４）、４−３４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５，１６６及び１６７）、４−３９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８，１６９及び１７０）、４−５９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１，１７２及び１７３）、４−６１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７４，１７５及び１７６）及び４−ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７，１７８及び１７９）が挙げられる。]
[0051] ＶＫ１ファミリーのメンバー及びそれらの軽鎖フレームワーク領域１、２、３としては、０１２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１８０，１８１及び１８２）、０２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３，１８４及び１８５）、０１８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６，１８７及び１８８）、０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８９，１９０及び１９１）、Ａ２０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９２，１９３及び１９４）、Ａ３０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９５，１９６及び１９７）、Ｌ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８，１９９及び２００）、Ｌ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０１，２０２及び２０３）、Ｌ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４，２０５及び２０６）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０７，２０８及び２０９）、Ｌ１８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０，２１１及び２１２）、Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１３，２１４及び２１５）、Ｌ１９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１６，２１７及び２１８）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１９，２２０，及び２２１）、Ｌ２３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２２，２２３及び２２４）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５，２２６及び２２７）、Ｌ２４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２８，２２９及び２３０）、Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１，２３２及び２３３）及びＬ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４，２３５及び２３６）が挙げられる。]
[0052] 本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及び／又はＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の１以上を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0053] 本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及び／又はＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の１以上及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）からの重鎖フレームワーク領域を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0054] 本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及び／又はＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の１以上及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）からの重鎖フレームワーク領域を含み、前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0055] 本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及び／又はＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の１以上及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）からの重鎖フレームワーク領域を含み、前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基をさらに含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0056] また、本発明は、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0057] また、本発明は、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）からの重鎖フレームワーク領域を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0058] また、本発明は、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）からの重鎖フレームワーク領域を含み、前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0059] また、本発明は、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）からの重鎖フレームワーク領域を含み、前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基をさらに含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0060] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及び／又はＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）の１以上を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0061] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及び／又はＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）の１以上及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）からの軽鎖フレームワーク領域を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0062] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及び／又はＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）の１以上及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）からの軽鎖フレームワーク領域を含み、前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0063] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及び／又はＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）の１以上及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）からの軽鎖フレームワーク領域を含み、前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基をさらに含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0064] 本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0065] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）からの軽鎖フレームワーク領域を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0066] 本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）からの軽鎖フレームワーク領域を含み、前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0067] 本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）からの軽鎖フレームワーク領域を含み、前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基をさらに含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0068] 本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と、必要に応じて、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域及び／又はヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からの重鎖フレームワーク領域と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0069] また、本発明は、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントのアミノ酸配列変異体を提供する。通常、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントのアミノ酸配列変異体は、軽鎖又は重鎖、例えば、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のような軽鎖又は重鎖領域配列の、原型のヒト化抗体の軽鎖及び／又は重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一の（少なくとも８０％のアミノ酸配列相同性を有する）軽鎖及び／又は重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列を有することができる。好ましくは、軽鎖及び／又は重鎖フレームワーク領域配列のアミノ酸配列相同性は、少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％、特に好ましくは９６％、さらに好ましくは９７％、さらに好ましくは９８％、最も好ましくは９９％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）である。本願明細書においては、上記配列との相同性は、最大の配列相同性を得るために配列を整合させ、必要に応じてギャップを導入した後における、ｖＷＦ残基に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントと同一の侯補配列におけるアミノ酸残基の割合と定義される。従って、配列同一性は、２つのポリペプチドのアミノ酸の位置の類似性を比較するために通常使用される標準的な方法で決定することができる。ＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡ等のコンピュータプログラムを使用すれば、２つのポリペプチドをアミノ酸が（いずれか又は両方の配列の全長に沿って、あるいはいずれか又は両方の配列の所定の部分に沿って）最適にマッチングされるように整合させることができる。プログラムにより、デフォルトオープニングペナルティーとデフォルトギャップペナルティを決定することができる。ＰＡＭ２５０（標準スコアマトリックス；Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｖｏｌ ５，ｓｕｐｐ．３（１９７８））等のスコアマトリックスをコンピュータプログラムと共に使用することができる。例えば、相同性（％）は、完全一致の総数に１００を乗算し、一致範囲内のより長い配列の長さと２つの配列を整合させるために配列に導入されたギャップの数で除算することにより算出することができる。]
[0070] 従って、本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９のフレームワーク領域と少なくとも８０％同一であるフレームワーク領域を含む重鎖可変領域配列及び／又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のフレームワーク領域と少なくとも８０％同一であるフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域配列を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。また、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７のフレームワーク領域と少なくとも８０％同一であるフレームワーク領域を含む重鎖可変領域配列及び／又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８のフレームワーク領域と少なくとも８０％同一であるフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域配列を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0071] 必要に応じて、ヒト化抗体は、ＨＣＤＲ１に１以上の置換、例えば、Ｆ２７Ｇ、Ｌ２９Ｉ、Ｔ３０Ｓ及び／又はＶ３４Ｗ置換を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＨＣＤＲ２に１以上の置換、例えば、Ｓ６１Ｐ及び／又はＡ６２Ｓ置換を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＬＣＤＲ１に１以上の置換、例えば、Ｓ２４Ｑ、Ｎ３０Ｓ及び／又はＫ３１Ｎ置換を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＬＣＤＲ２に１以上の置換、例えば、Ｙ５０Ｄ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５３Ｎ、Ｈ５５Ｅ及び／又はＳ５６Ｔ置換を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＨＣＤＲ１に１以上の置換、例えば、Ｆ２７Ｇ、Ｌ２９Ｉ、Ｔ３０Ｓ及び／又はＶ３４Ｗ置換を含み、ＨＣＤＲ２に１以上の置換、例えば、Ｓ６１Ｐ及び／又はＡ６２Ｓ置換を含み、ＬＣＤＲ１に１以上の置換、例えば、Ｓ２４Ｑ、Ｎ３０Ｓ及び／又はＫ３１Ｎ置換を含み、ＬＣＤＲ２に１以上の置換、例えば、Ｙ５０Ｄ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５３Ｎ、Ｈ５５Ｅ及び／又はＳ５６Ｔ置換を含むことができる。]
[0072] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、Ｈ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）（前記重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９によってそれぞれ示される）のいずれかを含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0073] 本発明は、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）のいずれかを含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0074] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）の１以上と、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）の１以上と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0075] 本発明は、Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）；Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）及びＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）；Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及びＨ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）；Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）及びＨ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）及びＨ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0076] 本発明は、１０ｎＭ以下、好ましくは５ｎＭ以下、より好ましくは１ｎＭ以下、最も好ましくは少なくとも約０．２〜約０．４ｎＭ（例えば、約０．２１、０．２８又は０．３４〜約０．２５、０．３２又は０．３８ｎＭ）の親和性（Ｋｄ）でｖＷＦに結合する、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。また、本発明は、１００ｎＭ以下、好ましくは５０ｎＭ以下、より好ましくは１０ｎＭ以下、最も好ましくは少なくとも約０．２〜約５．０ｎＭ（例えば、約０．２２、０．２８又は０．３４〜約２．３、３．５又は４．７ｎＭ）の親和性（Ｋｄ）でｖＷＦへの結合に競合する、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0077] また、本発明は、１０ｎＭ以下、好ましくは５ｎＭ以下、より好ましくは１ｎＭ以下、最も好ましくは少なくとも約０．２ｎＭ〜約０．４ｎＭ（例えば、約０．２１、０．２８又は０．３４〜約０．２５、０．３２又は０．３８ｎＭ）の親和性（Ｋｄ）でｖＷＦのＡ１ドメインに結合する、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。また、本発明は、１００ｎＭ以下、好ましくは５０ｎＭ以下、より好ましくは１０ｎＭ以下、最も好ましくは少なくとも約０．２ｎＭ〜約５．０ｎＭ（例えば、約０．２２、０．２８又は０．３４〜約２．３、３．５又は４．７ｎＭ）の親和性（Ｋｉ）でｖＷＦのＡ１ドメインへの結合に競合する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0078] また、本発明は、６５℃、好ましくは７０℃、より好ましくは７５℃、最も好ましくは８０℃を超えるＦＡＢフラグメント耐熱温度を有する、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。ＦＡＢフラグメント耐熱性の分析では、示差走査熱量測定を使用し、完全ＩｇＧではＦＡＢフラグメントの中間融点を特定する。このような熱量測定は当業者に知られており、例えば、Ｇａｒｂｅｒ ａｎｄ Ｄｅｍａｒｅｓｔ（２００７），ＢＢＲＣ ３５５：７５１−７に準拠して行うことができる。予期せぬことに、本発明のヒト化抗体は、原型の非ヒト化抗体よりも高いＦＡＢフラグメント耐熱温度を有することが判明した。原型の非ヒト化抗体は、通常はマウス抗体、特にマウス抗体ＮＭＣ−４である。従って、本発明は、原型の非ヒト化抗体よりも高いＦＡＢフラグメント耐熱温度を有する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0079] また、本発明は、超可変領域アミノ酸配列：ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ；ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２（ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３（ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３（ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）を含み、ＬＣＤＲ１及び／又はＬＣＤＲ２の少なくとも１つがそれぞれＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）又はＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）ではない、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。驚くべきことに、ＮＭＣ−４ ＬＣＤＲ１及び／又はＬＣＤＲ２を有していないヒト化ＮＭＣ−４抗体は、ｖＷＦに対するナノモル結合親和性を保持している。]
[0080] いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はヒト抗体重鎖フレームワーク領域を含むことができる。いくつかの実施形態では、重鎖フレームワーク領域は４−５９由来ヒト抗体に存在する重鎖フレームワーク領域に対応する。いくつかの実施形態では、４−５９由来ヒト抗体に存在する重鎖フレームワーク領域は１以上のマウス残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、４−５９由来ヒト抗体に存在する重鎖フレームワーク領域は１以上のマウス残基を含まない。]
[0081] いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はヒト抗体軽鎖フレームワーク領域を含むことができる。いくつかの実施形態では、軽鎖フレームワーク領域は０１８由来ヒト抗体に存在する軽鎖フレームワーク領域に対応する。いくつかの実施形態では、０１８由来ヒト抗体に存在する軽鎖フレームワーク領域は１以上のマウス残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、０１８由来ヒト抗体に存在する軽鎖フレームワーク領域は１以上のマウス残基を含まない。]
[0082] ＬＣＤＲ１及び／又はＬＣＤＲ２はヒトから得ることができる。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１及び／又はＬＣＤＲ２は同一の抗体（例えば、単一のヒト抗体）から得ることができる。別の実施形態では、ＬＣＤＲ１及び／又はＬＣＤＲ２は異なる抗体（例えば、２つのヒト抗体）から得ることができる。ＬＣＤＲ２をヒトから得る場合には、ＬＣＤＲ２は好ましくはＤＡＳＮＬＥＴ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１１８）である。]
[0083] また、本発明は、ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ；ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２（ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３（ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１（ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２（ＹＴＳＳＬＨＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３（ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と、ヒト抗体重鎖生殖系列配列４−５９に存在する重鎖フレームワーク領域に対応し、ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１）である重鎖フレームワーク領域１、ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７２）である重鎖フレームワーク領域２及びＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３）である重鎖フレームワーク領域３と、ヒト抗体軽鎖生殖系列配列０１８に存在するフレームワーク領域に対応し、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６）である軽鎖フレームワーク領域１、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８７）である軽鎖フレームワーク領域２及びＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８８）である軽鎖フレームワーク領域３と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0084] また、本発明は、ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ；ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２（ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３（ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１（ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２（ＹＴＳＳＬＨＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３（ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と、ヒト抗体重鎖生殖系列配列４−５９に存在する重鎖フレームワーク領域に対応し、ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１）である重鎖フレームワーク領域１、ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７２）である重鎖フレームワーク領域２及びＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３）である重鎖フレームワーク領域３と、ヒト抗体軽鎖生殖系列配列０１８に存在するフレームワーク領域に対応し、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６）である軽鎖フレームワーク領域１、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８７）である軽鎖フレームワーク領域２及びＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８８）である軽鎖フレームワーク領域３と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0085] また、本発明は、ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ；ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２（ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３（ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１（ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２（ＹＴＳＳＬＨＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３（ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と、ヒト抗体生殖細胞系列ファミリーＶＨ４の重鎖フレームワーク領域１、２、３に対応するフレームワーク領域１、２、３と、ヒト抗体生殖細胞系列ファミリーＶＫ１の軽鎖フレームワーク領域１、２、３に対応するフレームワーク領域１、２、３と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0086] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−０４に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＧＴＬＳＬＴＣＡＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１４７）、ＦＷ２：ＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４８）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＫＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４９）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0087] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−２８に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１５０）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）、ＦＷ３：ＲＶＴＭＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0088] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−３０．１に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１５３）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＨＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0089] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−３０．２に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＬＱＬＱＥＳＧＳＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１５６）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＲＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0090] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−３０．４に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１５９）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0091] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−３１に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１６２）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＨＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0092] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−３４に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１６５）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0093] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−３９に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１６８）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７０）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0094] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−５９に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１７１）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７２）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0095] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−６１に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１７４）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７５）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７６）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0096] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、重鎖可変生殖系列配列４−ｂに存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＳ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１７７）、ＦＷ２：ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７８）、ＦＷ３：ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７９）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0097] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列０１２に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１８０）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0098] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列０２に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１８３）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0099] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列０１８に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１８６）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８７）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８８）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0100] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列０８に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１８９）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９１）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0101] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ａ２０に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９２）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９３）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0102] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ａ３０に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９５）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９７）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0103] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ１４に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＮＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９８）、ＦＷ２：ＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＫＨＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９９）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0104] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ１４に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２０１）、ＦＷ２：ＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0105] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ１５に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２０４）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０５）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0106] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ４に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＡＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２０７）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０８）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0107] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ１８に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＡＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２１０）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１１）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１２）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0108] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ５に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２１３）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１４）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１５）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0109] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ５に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２１６）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１７）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１８）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0110] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ８に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２１９）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２０）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２１）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0111] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ２３に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＡＩＲＭＴＱＳＰＦＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２２２）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＡＫＡＰＫＬＦＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２３）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２４）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0112] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ９に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＡＩＲＭＴＱＳＰＳＳＦＳＡＳＴＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２２５）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２６）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＣＬＱＳＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２７）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0113] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ２４に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＶＩＷＭＴＱＳＰＳＬＬＳＡＳＴＧＤＲＶＴＩＳＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２２８）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＥＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２９）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＣＬＱＳＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３０）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0114] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ１１に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３１）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0115] ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、κ鎖可変生殖系列配列Ｌ１１に存在するフレームワーク領域１、２、３（例えば、ＦＷ１：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３４）、ＦＷ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５）、ＦＷ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６）に対応するフレームワーク領域１、２、３を含むことができる。]
[0116] また、本発明は、ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ；ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２（ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３（ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１（ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２（ＹＴＳＳＬＨＳ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３（ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と、ヒト抗体４−０４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４７，１４８及び１４９）、４−２８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５０，１５１及び１５２），４−３０．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３，１５４及び１５５）、４−３０．２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６，１５７及び１５８）、４−３０．４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９，１６０及び１６１）、４−３１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２，１６３及び１６４）、４−３４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５，１６６及び１６７）、４−３９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８，１６９及び１７０）、４−５９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１，１７２及び１７３）、４−６１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７４，１７５及び１７６）及び４−ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７，１７８及び１７９）の重鎖フレームワーク領域１、２、３に対応するフレームワーク領域１、２、３と、ヒト抗体０１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８０，１８１及び１８２）、０２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３，１８４及び１８５）、０１８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６，１８７及び１８８）、０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８９，１９０及び１９１）、Ａ２０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９２，１９３及び１９４）、Ａ３０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９５，１９６及び１９７）、Ｌ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８，１９９及び２００）、Ｌ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０１，２０２及び２０３）、Ｌ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４，２０５及び２０６）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０７，２０８及び２０９）、Ｌ１８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０，２１１及び２１２）、Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１３，２１４及び２１５）、Ｌ１９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１６，２１７及び２１８）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１９，２２０，及び２２１）、Ｌ２３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２２，２２３及び２２４）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５，２２６及び２２７）、Ｌ２４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２８，２２９及び２３０）、Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１，２３２及び２３３）及びＬ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４，２３５及び２３６）の軽鎖フレームワーク領域１、２、３に対応するフレームワーク領域１、２、３と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0117] また、本発明は、原型の非ヒト化抗体又は原型の非ヒト化抗体からの可変領域とヒトＦｃ領域を含むキメラ抗体と同じ活性を保持している、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。原型の非ヒト化抗体は、通常はマウス抗体、特にマウス抗体ＮＭＣ−４である。原型の非ヒト化抗体からの可変領域を含むキメラ抗体は、通常は、マウス抗体、特にマウス抗体ＮＭＣ−４からの可変領域と、ヒトＦｃ領域と、を含む抗体である。ヒトＦｃ領域としては、本願明細書に開示するヒトＦｃ領域を好ましくは使用する。]
[0118] 本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメント、原型の非ヒト化抗体及びキメラ抗体の活性は、実施例１に記載するようにＥＣ５０活性を決定することによってリストセチン誘発血小板凝集活性として測定することができる。本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントのＥＣ５０活性が、原型の非ヒト化抗体かキメラ抗体のＥＣ５０活性に対して５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは２０％以下異なる（例えば、高い又は低い）場合に、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、原型の非ヒト化抗体かキメラ抗体と同じ活性を保持しているとみなされる。]
[0119] 本発明の好適な実施形態では、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、ヒト抗体からの重鎖フレームワーク領域をさらに含み、前記重鎖フレームワーク領域は、１以上のマウス残基を含まない。]
[0120] 本発明の好適な実施形態では、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、ヒト抗体からの軽鎖フレームワーク領域をさらに含み、前記軽鎖フレームワーク領域は、１以上のマウス残基を含まない。]
[0121] 「１以上のマウス残基を含まないヒト重鎖フレームワーク領域」又は「１以上のマウス残基を含まないヒト軽鎖フレームワーク領域」とは、マウスのみに存在する１以上のマウス残基を含まない（例えば、マウスのみに存在し、ヒトには存在しない残基への復帰突然変異を含まない）軽鎖又は重鎖フレームワーク領域を意味する。上記定義は、マウスにも存在するヒト残基を含むヒト軽鎖又は重鎖フレームワーク領域を排除するものではない。また、ヒト（例えば、ほとんどのヒトフレームワーク領域に共通の残基）に変異したが、マウスには存在しない残基を有するヒト軽鎖又は重鎖フレームワーク領域は上記定義によって排除されない。]
[0122] ヒト抗体からの重鎖又は軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基をさらに含む本発明の実施形態の場合には、重鎖又は軽鎖フレームワーク領域は、１０以下、好ましくは９以下、より好ましくは８以下、さらに好ましくは７以下、最も好ましくは６以下、特に好ましくは５以下、さらに好ましくは４以下、さらに好ましくは３以下、さらに好ましくは２以下、最も好ましくは１個のマウス残基を通常は含む。]
[0123] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を提供する。]
[0124] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３７で示される重鎖配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８で示される軽鎖配列を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を提供する。]
[0125] また、本発明は、マウス抗体ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲに対応するＣＤＲ領域と、ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：４）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域と、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域と、を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を提供する。]
[0126] また、本発明は、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からの重鎖フレームワーク領域を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を提供する。ヒト重鎖フレームワーク領域のヌクレオチド配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６に記載する。]
[0127] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を提供する。ヒト軽鎖フレームワーク領域のヌクレオチド配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７に記載する。]
[0128] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）のいずれかを含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を提供する。]
[0129] また、本発明は、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）のいずれかを含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を提供する。]
[0130] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）の１以上と、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）の１以上と、を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を提供する。]
[0131] また、本発明は、２００８年１月２３日（寄託番号：ＤＳＭ２１０５９）に微生物としてＤＳＭＺに寄託されたベクターＧＳ２６４の核酸配列をコードする軽鎖を含む単離核酸を提供する。]
[0132] また、本発明は、２００８年１月２３日（寄託番号：ＤＳＭ２１０６０）に微生物としてＤＳＭＺに寄託されたベクターＧＳ２６５の核酸配列をコードする重鎖を含む単離核酸を提供する。]
[0133] 従って、本発明は、ベクターＧＳ２６４の核酸配列をコードする軽鎖及びベクターＧＳ２６５の核酸配列をコードする重鎖によってコードされた、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。]
[0134] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0135] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３７で示される重鎖配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８で示される軽鎖配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0136] また、本発明は、マウス抗体ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲに対応するＣＤＲ領域と、ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：４）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域と、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域と、を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0137] また、本発明は、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）からの重鎖フレームワーク領域を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0138] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0139] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）のいずれかを含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0140] また、本発明は、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）のいずれかを含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0141] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）の１以上と、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）の１以上と、を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0142] また、本発明は、２００８年１月２３日（寄託番号：ＤＳＭ２１０５９）に微生物としてＤＳＭＺに寄託されたベクターＧＳ２６４の核酸配列をコードする軽鎖を含む単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0143] また、本発明は、２００８年１月２３日（寄託番号：ＤＳＭ２１０６０）に微生物としてＤＳＭＺに寄託されたベクターＧＳ２６５の核酸配列をコードする重鎖を含む単離核酸を含むベクターを提供する。]
[0144] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0145] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３７で示される重鎖配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８で示される軽鎖配列を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0146] また、本発明は、マウス抗体ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲに対応するＣＤＲ領域と、ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：４）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域と、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域と、を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0147] また、本発明は、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）からの重鎖フレームワーク領域を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0148] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0149] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）のいずれかを含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0150] また、本発明は、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）のいずれかを含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0151] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）の１以上と、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）の１以上と、を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0152] また、本発明は、２００８年１月２３日（寄託番号：ＤＳＭ２１０５９）に微生物としてＤＳＭＺに寄託されたベクターＧＳ２６４の核酸配列をコードする軽鎖を含む単離核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0153] また、本発明は、２００８年１月２３日（寄託番号：ＤＳＭ２１０６０）に微生物としてＤＳＭＺに寄託されたベクターＧＳ２６５の核酸配列をコードする軽鎖を含む単離核酸を含む宿主細胞を提供する。]
[0154] また、本発明は、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントの製造方法であって、本願明細書に開示する宿主細胞を培養して核酸を発現させ、前記抗体を製造することを含む方法に関する。本発明のヒト化抗体又はその結合性フラグメントの製造方法は、宿主細胞培養物から抗体を回収することをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞培地から抗体を回収するすることができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞を培養する前に、重鎖可変領域をコードする核酸を含むベクター及び軽鎖可変領域をコードする核酸を含むベクターによる宿主細胞に対する共トランスフェクションを行うことができる。]
[0155] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを含む組成物を提供する。]
[0156] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物を提供する。]
[0157] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３７で示される重鎖配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８で示される軽鎖配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを含む組成物を提供する。]
[0158] 本発明は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３７で示される重鎖配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８で示される軽鎖配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物を提供する。]
[0159] また、本発明は、マウス抗体ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲに対応するＣＤＲ領域と、ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：４）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域と、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域と、を含む、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物を提供する。]
[0160] また、本発明は、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からの重鎖フレームワーク領域を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物を提供する。]
[0161] また、本発明は、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物を提供する。]
[0162] 本発明は、重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）と、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）と必要に応じて、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域及び／又はヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からの重鎖フレームワーク領域と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物を提供する。]
[0163] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、Ｈ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）のいずれかを含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを含む組成物を提供する。]
[0164] 本発明は、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）のいずれかを含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物を提供する。]
[0165] また、本発明は、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）のいずれかと、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）のいずれと、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物を提供する。]
[0166] また、本発明は、本願明細書に開示する第１のヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、ｖＷＦのＡ１ドメインに結合する第２の抗体と、を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、第２の抗体はＡＪＷ−２００である。]
[0167] また、本発明は、被投与者（例えば、ヒト）におけるｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量の、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はそのフラグメントを前記被投与者に投与することを含む方法を提供する。]
[0168] また、本発明は、被投与者（例えば、ヒト）におけるｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量の、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３７で示される重鎖配列及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８で示される軽鎖配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はそのフラグメントを前記被投与者に投与することを含む方法を提供する。]
[0169] また、本発明は、被投与者（例えば、ヒト）におけるｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量の、マウス抗体ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲに対応するＣＤＲ領域と、ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：４）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域と、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域と、を含む、ヒトｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを前記被投与者に投与することを含む方法を提供する。]
[0170] また、本発明は、被投与者（例えば、ヒト）におけるｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量の、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からの重鎖フレームワーク領域を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はそのフラグメントを前記被投与者に投与することを含む方法を提供する。]
[0171] 血栓疾患は、心臓血管疾患又は虚血性脳卒中等の脳血管疾患であってもよい。いくつかの実施形態では、心臓血管疾患は、アテローム性動脈硬化、再狭窄、口峡炎、急性心筋梗塞、急性冠症候群又は糖尿病に伴う心臓血管疾患である。いくつかの実施形態では、血栓症又は血栓疾患は、血管炎症、静脈血栓症、鎌状赤血球病、異種移植拒絶反応、末梢血管疾患、血栓性血小板減少性紫斑症、嚢胞性繊維症、血管性認知症、レイノー病、関節リウマチ又は糖尿病である。いくつかの実施形態では、脳血管障害は、脳動脈梗塞及び腺窩性小梗塞による虚血性脳卒中及び血管性認知症を含んでもよい。また、ヒト化ｖＷＦ抗体は、再発性脳卒中又は脳血管炎症によって引き起こされた脳卒中の予防に使用することができる。]
[0172] いくつかの実施形態では、血栓症又は血栓疾患は癌を含んでもよい。]
[0173] 本発明は、被投与者（例えば、ヒト）におけるｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量の、軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はそのフラグメントを前記被投与者に投与することを含む方法を提供する。]
[0174] また、本発明は、被投与者（例えば、ヒト）におけるｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量の、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）のいずれかを含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はそのフラグメントを前記被投与者に投与することを含む方法を提供する。]
[0175] 本発明は、被投与者（例えば、ヒト）におけるｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量の、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）のいずれかを含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はそのフラグメントを前記被投与者に投与することを含む方法を提供する。]
[0176] また、本発明は、被投与者における（例えば、ヒト）ｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量の、重鎖可変領域：Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、又はＨ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）のいずれかと、軽鎖可変領域：Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、又はＬ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）のいずれかと、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はそのフラグメントを前記被投与者に投与することを含む方法を提供する。]
[0177] いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は作動因子機能を有していない。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＩｇＧ４に由来するＦｃ領域を含む。]
[0178] 本発明は、有意な出血の臨床的徴候を引き起こすことなく、ＥＤ１００の１〜約２５０倍の治療有効量で投与することができる、ヒトフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントを提供する。好ましくは、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、ヒトｖＷＦのＡ１ドメインに特異的である。より好ましくは、ｖＷＦに特異的なヒト抗体又はその結合性フラグメントは、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントである。]
[0179] また、本発明は、被投与者（好ましくはヒト）におけるｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための方法であって、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを、約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００２〜約２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．００２〜約１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．００２〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．００５〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約０．０１〜約０．１ｍｇ／ｋｇの治療有効量で前記被投与者に投与する方法を提供する。]
[0180] また、本発明は、ｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための方法であって、本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを、ＥＤ１００の約１〜約２５０倍、好ましくは約１〜約２００倍、より好ましくは約１〜約１００倍の治療有効量で被投与者に投与する方法を提供する。]
[0181] また、本発明は、ｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための方法であって、治療有効量の本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを治療を必要とする被投与者に１又は複数の投与によって投与する方法に関する。]
[0182] また、本発明は、ｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための方法であって、治療有効量の本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを治療を必要とする被投与者に皮下投与する方法に関する。]
[0183] また、本発明は、ｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための方法であって、治療有効量の本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを治療を必要とする被投与者に静脈内投与する方法に関する。]
[0184] また、本発明は、ｖＷＦ媒介疾患又は障害（例えば、血栓症又は血栓疾患）を治療するための方法であって、治療有効量の本願明細書に開示するヒト化抗体又はその結合性フラグメントを、放射線治療（例えば、放射性物質の照射又は導入（例えば、ＵＩＣＣ（Ｅｄ．），Ｋｌｉｎｉｓｃｈｅ Ｏｎｋｏｌｏｇｉｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ（１９８２）を参照））と順次又は組み合わせて、治療を必要とする被投与者に投与する方法に関する。]
[0185] 本発明の実施又は試験において本願明細書に開示する方法及び材料と同等又は均等な方法及び材料を使用することができるが、好ましい方法及び材料は本願明細書に開示する方法及び材料である。]
[0186] ヒト化フォンウィレブランド因子抗体の製造
本発明は、ヒト化フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）抗体（例えば、マウスＮＭＣ−４）又はその結合性フラグメントの製造方法を提供する。ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、ヒト以外の動物（例えば、マウス）からのＶＨ及び／又はＶＬ領域からの１以上のＣＤＲ又はその一部を、ヒトＶＨ及び／又はＶＬ領域からの１以上のフレームワーク領域に導入することによって製造することができる。必要に応じて、ＶＨ及び／又はＶＬ領域に存在するヒトフレームワーク残基を、結合親和性を維持するために必要又は望ましい対応する非ヒト（例えば、マウス）残基によって置換することができる。必要に応じて、ＣＤＲに存在する非ヒトアミノ酸残基をヒト残基によって置換することができる。]
[0187] 本願明細書に開示するフレームワーク及びＣＤＲ（ＨＦＲ１及びＨＣＤＲ１は除く）の分類は、Ｋａｂａｔ付番方式に基づくものである。この定義では、重鎖のＣＤＲは残基３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖のＣＤＲは残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、８９〜９７（ＬＣＤＲ３）を含む。ＶＨ（例えば、重鎖フレームワーク領域１（ＨＦＲ１）、重鎖フレームワーク領域２（ＨＦＲ２）、重鎖フレームワーク領域３（ＨＦＲ３）及び／又は重鎖フレームワーク領域４（ＨＦＲ４））のフレームワーク領域は、残基１〜３０（ＨＦＲ１）、３６〜４９（ＨＦＲ２）、６６〜９４（ＨＦＲ３）、１０３〜１１３（ＨＦＲ４）を含み、ＶＬのフレームワーク領域は、残基１〜２３（ＬＦＲ１）、３５〜４９（ＬＦＲ２）、５７〜８８（ＬＦＲ３）、９８〜１０７（ＬＦＲ４）を含む（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，１９７０ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１３２：２１１）。一方、ＣＤＲの構造に基づき、ＣｈｏｔｈｉａはＣＤＲ１−Ｈが残基２６〜３２を含むと定義している（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９）。ＡｂＭ（抗体モデル）定義は、ＣＤＲ１−Ｈが残基２６〜３５を含むとするＯｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデルソフトウェアが使用する折衷案である。ＮＭＣ−４を使用する本願明細書に開示するヒト化方法は、この定義を使用する。]
[0188] フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントは、ＮＭＣ−４からの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を、ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：４）の可変領域におけるフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域に導入し、ＮＭＣ−４からの軽鎖ＣＤＲを、ヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域におけるフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域に導入することによって製造することができる。]
[0189] また、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体は、マウスＮＭＣ−４からの１以上の重鎖ＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９））を、ヒトフレームワーク領域（例えば、ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からのフレームワーク領域）に導入することによって製造することができる。]
[0190] また、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体は、１以上の軽鎖ＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２））を、ヒトフレームワーク領域（例えば、ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からのヒトフレームワーク領域）に導入することによって製造することができる。]
[0191] また、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体は、マウスＮＭＣ−４からの１以上の重鎖ＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９））を、ヒトフレームワーク領域（例えば、ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の可変領域からのフレームワーク領域）に導入し、１以上の軽鎖ＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２））を、ヒトフレームワーク領域（例えば、ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の可変領域からのヒトフレームワーク領域）に導入することによって製造することができる。]
[0192] ｖＷＦに特異的なヒト化抗体は、ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域を含む修飾重鎖可変領域（例えば、Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、Ｈ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）をヒト定常領域に導入することによって製造することができる。]
[0193] また、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体は、ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域を含む修飾軽鎖可変領域（例えば、Ｌ５（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０））をヒト定常領域に導入することによって製造することができる。]
[0194] ｖＷＦに特異的なヒト化抗体は、ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域を含む修飾重鎖可変領域（例えば、Ｈ２（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）、Ｈ１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）をヒト定常領域に導入し、ＮＭＣ−４に存在するＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域を含む修飾軽鎖可変領域（例えば、Ｌ５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、Ｌ１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０））をヒト定常領域に導入することによって製造することができる。]
[0195] ヒト化抗体の免疫原性をさらに減少させるために、ＣＤＲにおける残基（例えば、マウス残基）をヒトアミノ酸残基に変更する（例えば、置換する）ことができる。例えば、ヒト化抗体は、ＨＣＤＲ１にＦ２７Ｇ、Ｌ２９Ｉ、Ｔ３０Ｓ及び／又はＶ３４Ｗ置換の１以上を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＨＣＤＲ２にＳ６１Ｐ及び／又はＡ６２Ｓ置換の１以上を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＬＣＤＲ１にＳ２４Ｑ、Ｎ３０Ｓ及び／又はＫ３１Ｎ置換の１以上を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＬＣＤＲ２に１以上の置換、例えば、Ｙ５０Ｄ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５３Ｎ、Ｈ５５Ｅ及び／又はＳ５６Ｔ置換を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＨＣＤＲ１にＦ２７Ｇ、Ｌ２９Ｉ、Ｔ３０Ｓ及び／又はＶ３４Ｗ置換の１以上を含み、ＨＣＤＲ２にＳ６１Ｐ及び／又はＡ６２Ｓ置換の１以上を含み、ＬＣＤＲ１にＳ２４Ｑ、Ｎ３０Ｓ及び／又はＫ３１Ｎ置換の１以上を含み、ＬＣＤＲ２にＹ５０Ｄ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５３Ｎ、Ｈ５５Ｅ及び／又はＳ５６Ｔ置換の１以上を含むことができる。]
[0196] 様々な形態のヒト化抗体を使用することができる。例えば、ヒト化抗体は、免疫抱合体を生成するために１以上の細胞毒性薬と任意に結合させるＦａｂ等の抗体フラグメントであってもよい。あるいは、ヒト化抗体又は親和性成熟抗体（ａｆｆｉｎｉｔｙ−ｍａｔｕｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）は、完全ＩｇＧ１抗体等の完全抗体であってもよい。]
[0197] ヒト化抗体の抗体フラグメントを製造するために様々な方法が開発されている。従来は、これらのフラグメントは完全抗体のタンパク分解によって得ていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２４：１０７−１１７（１９９２）；Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照）。現在は、これらのフラグメントは組換え型宿主細胞によって直接製造することができる。例えば、抗体フラグメントは、上述した抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを大腸菌から直接回収し、化学的に結合させてＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１６３−１６７（１９９２））。別の方法では、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを組換え型宿主細胞培養物から直接単離することができる。その他の抗体フラグメント製造方法は当業者には明らかであろう。別の実施形態では、抗体は一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。国際公開第ＷＯ１９９３／１６１８５号、米国特許第５，５７１，８９４号及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照されたい。また、抗体フラグメントは、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に開示されているような線状抗体であってもよい。]
[0198] 別の方法では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）を免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合することができる。融合は、少なくともヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３領域の一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインによって行うことが好ましい。第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）は、融合領域の少なくとも１つに存在する軽鎖結合に必要な部位を含むことが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合領域をコードするＤＮＡ及び必要に応じて免疫グロブリン軽鎖を別々の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物に共トランスフェクションする。これにより、３本のポリペプチド鎖を均等ではない比率で使用することによって最適な収量を得る実施形態において、３つのポリペプチドフラグメントの割合を柔軟に調節することができる。ただし、少なくとも２本のポリペプチド鎖を等比で発現させることによって高収量が得られる場合や、比率が特に重要ではない場合には、２又は３本のポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することも可能である。]
[0199] また、本発明は、化学療法薬、毒素（例えば、細菌、真菌、植物又は動物由来の小分子毒素又はその酵素的に活性な毒素、そのフラグメント及び／又は変異体）、放射性同位体（すなわち、放射性抱合体（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））等の細胞毒性薬に結合した抗体を含む免疫抱合体に関する。]
[0200] 本発明は、抗体と核酸分解活性を有する化合物（例えば、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮアーゼ）等のリボヌクレアーゼ又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ）との間に形成された免疫抱合体を提供する。]
[0201] 放射性結合ヒト化ｖＷＦ抗体を製造するために放射性同位体を使用することができる。放射性同位体の例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｌｕの放射性同位体が挙げられる。]
[0202] 抗体と細胞毒性薬の抱合体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジスクシニミジル等）、アルデヒド（グルタルデヒド等）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビスジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムべンゾイル）エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トリレン２，６−ジイソシアネート等）、ビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）等の様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して製造することができる。例えば、リシン免疫毒素はＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８（１９８７）に開示されているように調製することができる。放射性ヌクレオチドを抗体に結合するためのキレート化剤の例としては、炭素１４−標識１−イソチオシアナートベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）が挙げられる。国際公開第ＷＯ１９９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは、細胞における細胞毒性薬の放出を容易化する開裂性リンカー（ｃｌｅａｖａｂｌｅ ｌｉｎｋｅｒ）であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカー又は二硫化物含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５２：１２７−１３１（１９９２））を使用することができる。]
[0203] ヒト化ｖＷＦ抗体と細胞毒性薬を含む融合タンパク質は、例えば組換え技術又はペプチド合成によって製造することができる。]
[0204] さらに別の実施形態では、ヒト化ｖＷＦ抗体は、抗体−受容体抱合体を患者に投与し、洗浄剤を使用して未結合抱合体を循環経路から除去した後、細胞毒性薬（例えば、放射性ヌクレオチド）に結合したリガンド（例えば、アビジン）を投与する腫瘍プレターゲッティングにおいて利用するための受容体（ストレプトアビジン等）に結合させることができる。]
[0205] 本発明の抗体は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法薬、国際公開第ＷＯ１９８１／０１１４５号を参照）を活性抗ガン剤（例えば、国際公開第ＷＯ１９８８／０７３７８号及び米国特許第４，９７５，２７８号を参照）に転換するプロドラッグ活性化酵素にヒト化ｖＷＦ抗体を結合することによってＡＤＥＰＴにおいて使用することができる。]
[0206] ＡＤＥＰＴに有用な免疫抱合体の酵素成分は、プロドラッグをより活性の高い細胞毒性形態に転換するようにプロドラッグに作用する酵素を含む。]
[0207] 有用な酵素の例としては、これらに限定されるものではないが、リン酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に転換するために有用なアルカリホスファターゼ；硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に転換するために有用なアリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗癌薬の５−フルオロウラシルに転換するために有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に転換するために有用な、例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ及びカテプシン（カテプシンＢ及びＬ等）等のプロテアーゼ；β−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを転換するために有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に転換するために有用な糖鎖開裂酵素（β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼ等）；β−ラクタムで誘導化された薬剤を遊離薬物に転換するために有用なβ−ラクタマーゼ；アミン窒素基をフェノキシアセチル基又はフェニルアセチル基で各々誘導化された薬物を遊離薬物に転換するために有用なペニシリンアミダーゼ（ペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼ等）が挙げられる。あるいは、アブザイムとして知られる酵素活性を有する抗体を使用して本発明のプロドラッグを遊離活性薬物に変換することができる（例えば、Ｍａｓｓｅｙ，Ｎａｔｕｒｅ ３２８：４５７−４５８（１９８７）参照）。抗体−アブザイム抱合体は、腫瘍細胞へのアブザイムを送達するために本願明細書に開示するように調製することができる。]
[0208] 酵素は、上述したヘテロ二官能性架橋試薬を使用する等の周知の方法によってヒト化ｖＷＦ抗体に共有結合させることができる。あるいは、適当な酵素の少なくとも機能的に活性な部分に結合した抗体の少なくとも抗原結合領域を含む融合タンパク質は、周知の組換えＤＮＡ技術を使用して作成することができる（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８（１９８４）参照）。]
[0209] 抗体のその他の修飾も考えられる。例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマー等様々な非タンパク様ポリマーの１つに抗体を結合させることができる。また、抗体は、コアセルベーション法、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル等の界面重合法、コロイド（例えば、リポソーム、アルブミン小球体、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、ナノカプセル）のドラッグデリバリシステム、マクロ乳化等によってマイクロカプセル化することもできる。このような方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第ｌ６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０）に開示されている。]
[0210] また、本願明細書に開示するヒト化ｖＷＦ抗体は、免疫リポソームとして製剤化することができる。抗体を含むリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号及び第４，５４４，５４５号；１９９７年１０月２３日に公開された国際公開第ＷＯ１９９７／３８７３１号に開示されているように公知の方法によって調製する。循環時間が改善されたリポソームは米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。]
[0211] 特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ−誘導化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を使用して逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは所定の孔径を有するフィルターから押し出して所望の直径を有するリポソームを得る。抗体のＦａｂ’フラグメントは、ジスルフィド相互交換反応を介して、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されるようにリポソームに結合させることができる。必要に応じて、化学療法薬をリポソーム内に含有させる。Ｇａｂｉｚｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８１（１９）：１４８４（１９８９）を参照されたい。]
[0212] ベクター、宿主細胞及び組換え方法
また、本発明は、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体及びその結合性フラグメントをコードする単離核酸、前記核酸を含むベクター及び宿主細胞、抗体又はその結合性フラグメントを製造するための組換え技術を提供する。]
[0213] 抗体を組換えによって製造する場合には、抗体をコードする核酸を単離し、クローニング（ＤＮＡの増幅）又は発現のために複製可能なベクターに挿入することができる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは単離し、従来の方法によって（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）配列を決定することができる。多くのベクターを利用することができる。ベクター成分の例として、これらに限定されるものではないが、シグナル配列、複製起点、１以上の標識遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター及び転写終結配列の１以上が挙げられる。]
[0214] （ｉ）シグナル配列成分
本願明細書に開示するヒト化ｖＷＦ抗体は、組換えによって直接製造するだけではなく、好ましくはシグナル配列又は成熟タンパク質又はポリペプチドのＮ−末端に特異的開裂部位を有する他のポリペプチドである異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドを含む組換え体として製造することもできる。異種シグナル配列は、好ましくは、宿主細胞によって認識及びプロセッシングされる（例えば、シグナルペプチダーゼによって開裂する）配列である。ヒト化ｖＷＦ抗体シグナル配列を認識及びプロセッシングしない原核宿主細胞の場合、前記シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐ及び耐熱性エンテロトキシンＩＩリーダーからなる群から選択される原核シグナル配列で置換することができる。酵母の分泌の場合には、例えば、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー（サッカロミセス及びクルイベロミセスα因子リーダー等）、酸ホスファターゼリーダー、Ｃ．アルビカンスグルコアミラーゼリーダー又は国際公開第ＷＯ１９９０／１３６４６に開示されたシグナルによって天然型シグナル配列が置換されていてもよい。哺乳動物細胞の発現において、哺乳動物シグナル配列及びウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルを使用することができる。]
[0215] そのような前駆体領域のＤＮＡは、読み取りフレーム内においてヒト化ｖＷＦ抗体をコードするＤＮＡに連結することができる。]
[0216] （ｉｉ）複製起点成分
発現ベクター及びクローニングベクターは、１以上の選択された宿主細胞内でベクターの複製を可能とする核酸配列を含む。通常、上記配列は、クローニングベクターにおいて宿主の染色体ＤＮＡとは独立してベクターの複製を可能とし、複製起点又は自己複製配列を含む。そのような配列は、様々な細菌、酵母、ウイルスについて周知である。プラスミドｐＢＲ３２２からの複製起点はほとんどのグラム陰性細菌に好適であり、２μプラスミド起点は酵母に好適であり、様々なウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ）は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに好適である。通常、複製起点成分は哺乳動物発現ベクターには必要ではない（通常、初期プロモーターを含むためにＳＶ４０起点が使用される）。]
[0217] （ｉｉｉ）選択遺伝子成分
発現ベクター及びクローニングベクターは、選択可能マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含むことができる。代表的な選択遺伝子は、（ａ）アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセート又はテトラサイクリン等な抗生物質又は他の毒素に耐性を与え、（ｂ）栄養要求性欠陥を補い、（ｃ）複合培地（例えば、杆菌のＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子）から得られない必要又は所望の栄養分を供給するタンパク質をコードする。]
[0218] 選択方法の一例では、宿主細胞の成長を阻害する薬剤を使用する。異種遺伝子によって形質転換された細胞は、薬剤耐性を与えるタンパク質を産生し、選択レジメンを切り抜ける。このような優性選択の例では、ネオマイシン、マイコフェノール酸及びハイグロマイシン等の薬剤を使用する。]
[0219] 哺乳動物細胞に好適な選択可能マーカーの別の例としては、ヒト化ｖＷＦ抗体をコードする核酸、例えば、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉ及び−ＩＩ、好ましくは、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ等を取り込むことができる細胞の同定を可能とするマーカーが挙げられる。]
[0220] 例えば、ＤＨＦＲ選択遺伝子によって形質転換された細胞は、ＤＨＦＲの競合的拮抗薬であるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含む培地で形質転換体を培養して同定する。野生型ＤＨＦＲを使用する場合に適当な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞株である。]
[0221] あるいは、ヒト化ｖＷＦ抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質及び他の選択可能マーカー（アミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）等）をコードするＤＮＡ配列で形質転換又は同時形質転換された宿主細胞（特に内因性ＤＨＦＲを含む野生型宿主）は、アミノグリコシド系抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシン又はＧ４１８を含む選択可能なマーカーの選択物質を含む培地における細胞増殖によって選択することができる（例えば、米国特許第４，９６５，１９９号を参照）。]
[0222] 酵母において好適な選択遺伝子は、酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である（Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８２：３９（１９７９））。ｔｒｐ１遺伝子により、トリプトファンにおける増殖能力がない酵母の突然変異株、例えば、ＡＴＣＣＮｏ．４４０７６又はＰＥＰ４−１の選択マーカーが得られる（Ｊｏｎｅｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８５：１２（１９７７））。酵母宿主細胞ゲノムのｔｒｐ１病変の存在により、トリプトファンの不在下での増殖による形質転換を検出する有効な環境が提供される。同様に、Ｌｅｕ２遺伝子を有するプラスミドにより、Ｌｅｕ２欠損酵母株（ＡＴＣＣ ２０，６２２又は３８，６２６）を使用することができる。]
[0223] また、１．６μｍ環状プラスミドｐＫＤ１に由来するベクターをクルイベロミセス酵母の形質転換に使用することができる。あるいは、Ｋ．ｌａｃｔｉｓの組換え型仔ウシキモシンの大規模産生のための発現方法がＶａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：１３５（１９９０）に報告されている。クルイベロミセスの工業用菌株による成熟組換え型ヒト血清アルブミンの分泌のための安定なマルチコピー発現ベクターも開示されている（Ｆｌｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：９６８−９７５（１９９１））。]
[0224] （ｉｖ）プロモーター成分
発現及びクローニングベクターは、宿主生物によって認識され、ヒト化ｖＷＦ抗体をコードする核酸に作動的に結合することができるプロモーターを通常は含む。原核生物宿主との使用に好適なプロモーターの例としては、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系及びｔａｃプロモーター等のハイブリッドプロモーターが挙げられる。ただし、他の公知の細菌プロモーターも適している。また、細菌系において使用するプロモーターは、ヒト化ｖＷＦ抗体をコードするＤＮＡに作動的に結合されたＳｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ（Ｓ．Ｄ．）配列を含むことができる。]
[0225] 真核生物についてのプロモーター配列は公知である。真核細胞遺伝子は、転写開始部位から約２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写開始部位から７０〜８０上流にある他の配列は、Ｎが任意のヌクレオチドであるＣＮＣＡＡＴ（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：３１）領域である。ほとんどの真核遺伝子の３’末端は、コード配列の３’末端にポリＡ尾部を付加するためのシグナルであるＡＡＴＡＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）配列である。これらの配列は真核細胞発現ベクターに好適に挿入される。酵母宿主と共に使用するために好適なプロモーター配列の例としては、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ又はエノラーゼ等の他の解糖系酵素、グリセルアルデヒド３‐リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、グルコースリン酸イソメラーゼ、グルコキナーゼが挙げられる。]

权利要求:

請求項1
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列と、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列と、を含む、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項2
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２３７で示される重鎖配列と、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２３８で示される軽鎖配列と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項3
（ａ）マウス抗体ＮＭＣ−４の重鎖及び軽鎖可変領域（ＳＥＱＩＤＮＯ：１及び２）に存在する相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応する重鎖及び軽鎖ＣＤＲと、（ｂ）ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域及び／又はヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）の可変領域に存在するフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域と、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項4
ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）からなる群から選択される１以上の重鎖ＣＤＲと、ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）からなる群から選択される１以上の軽鎖ＣＤＲと、を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項5
重鎖ＣＤＲ：ＨＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）及びＨＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）及び／又は軽鎖ＣＤＲ：ＬＣＤＲ１：ＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）、ＬＣＤＲ２：ＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）及びＬＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項6
請求項４又は５において、ヒト抗体ＡＡＣ１８１６５．１（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）の可変領域からの重鎖フレームワーク領域及び／又はヒト抗体ＡＡＫ９４８０８（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）の可変領域からの軽鎖フレームワーク領域をさらに含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項7
請求項６において、前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基をさらに含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項8
請求項６において、前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項9
請求項６において、前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基をさらに含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項10
請求項６において、前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項11
請求項４又は５において、Ｈ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４５）、Ｈ１６（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４６）からなる群から選択される重鎖可変領域を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項12
請求項４又は５において、Ｌ５（ＳＥＱＩＤＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱＩＤＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）、Ｌ１１（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項13
請求項４又は５において、Ｈ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、Ｈ４（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）、Ｈ５（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、Ｈ６（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、Ｈ７（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、Ｈ８（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、Ｈ９（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）、Ｈ１２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、Ｈ１３（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、Ｈ１４（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、Ｈ１５（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４５）、Ｈ１６（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４６）からなる群から選択される重鎖可変領域と、Ｌ５（ＳＥＱＩＤＮＯ：２３）、Ｌ４（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）、Ｌ６（ＳＥＱＩＤＮＯ：２５）、Ｌ７（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）、Ｌ８（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）、Ｌ９（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）、Ｌ１０（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）、Ｌ１１（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）からなる群から選択される軽鎖可変領域と、を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項14
請求項５において、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９のフレームワーク領域と少なくとも８０％同一であるフレームワーク領域を含む重鎖可変領域配列及び／又はＳＥＱＩＤＮＯ：２８のフレームワーク領域と少なくとも８０％同一であるフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域配列を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項15
請求項５において、ヒト抗体ファミリーＶＨ４のフレームワーク領域に対応する重鎖フレームワーク領域と、ヒト抗体ファミリーＶＫ１のフレームワーク領域に対応する軽鎖フレームワーク領域と、をさらに含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項16
請求項５において、ヒト抗体重鎖生殖系列配列４−５９に存在する重鎖フレームワーク領域に対応し、ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７１）である重鎖フレームワーク領域１、ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７２）である重鎖フレームワーク領域２及びＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７３）である重鎖フレームワーク領域３と、ヒト抗体軽鎖生殖系列配列０１８に存在するフレームワーク領域に対応し、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８６）である軽鎖フレームワーク領域１、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８７）である軽鎖フレームワーク領域２及びＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８８）である軽鎖フレームワーク領域３と、をさらに含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項17
請求項５において、ヒト抗体重鎖生殖系列配列４−３４に存在する重鎖フレームワーク領域に対応し、ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６５）である重鎖フレームワーク領域１、ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６６）である重鎖フレームワーク領域２及びＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６７）である重鎖フレームワーク領域３と、ヒト抗体軽鎖生殖系列配列０１８に存在するフレームワーク領域に対応し、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８６）である軽鎖フレームワーク領域１、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８７）である軽鎖フレームワーク領域２及びＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８８）である軽鎖フレームワーク領域３と、をさらに含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項18
請求項１〜１７のいずれか１項において、１０ｎＭ以下の親和性（Ｋｄ）でｖＷＦに結合する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項19
請求項１〜１７のいずれか１項において、１００ｎＭ以下の親和性（Ｋｉ）でｖＷＦへの結合に競合する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項20
請求項１〜１７のいずれか１項において、１０ｎＭ以下の親和性（Ｋｄ）でｖＷＦのＡ１ドメインに結合する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項21
請求項１〜１７のいずれか１項において、１００ｎＭ以下の親和性（Ｋｉ）でｖＷＦのＡ１ドメインへの結合に競合する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項22
請求項１〜１７のいずれか１項において、６５℃以上のＦＡＢフラグメント耐熱温度を有する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項23
請求項１〜１７のいずれか１項において、原型の非ヒト化抗体よりも高いＦＡＢフラグメント耐熱温度を有する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項24
重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＳＬＴＤＹＧＶＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、重鎖ＣＤＲ２：ＭＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、重鎖ＣＤＲ３：ＤＰＡＤＹＧＮＹＤＹＡＬＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＹＥＫＬＰＷＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１がＳＡＳＱＤＩＮＫＹＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）ではない及び／又は前記軽鎖ＣＤＲ２がＹＴＳＳＬＨＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）ではない、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項25
請求項２４において、ヒト抗体重鎖フレームワーク領域及び／又はヒト抗体軽鎖フレームワーク領域をさらに含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項26
請求項２５において、前記重鎖フレームワーク領域が、４−５９由来ヒト抗体に存在する重鎖フレームワーク領域に対応する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項27
請求項２６において、４−５９由来ヒト抗体に存在する前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基をさらに含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項28
請求項２６において、４−５９由来ヒト抗体に存在する前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項29
請求項２５において、前記軽鎖フレームワーク領域が、０１８由来ヒト抗体に存在する軽鎖フレームワーク領域に対応する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項30
請求項２９において、０１８由来ヒト抗体に存在する前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基をさらに含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項31
請求項２９において、０１８由来ヒト抗体に存在する前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項32
請求項２６において、前記４−５９由来ヒト抗体がＡＡＣ１８１６５．１である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項33
請求項２９において、前記０１８由来ヒト抗体がＡＡＫ９４８０８である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項34
請求項２４において、ＬＣＤＲ１及び／又はＬＣＤＲ２がヒト抗体からのＣＤＲである、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項35
請求項３４において、ＬＣＤＲ２がＤＡＳＮＬＥＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１８）である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項36
請求項１から１７及び２４のいずれか１項において、ＨＣＤＲ１が、Ｆ２７Ｇ、Ｌ２９Ｉ、Ｔ３０Ｓ及びＶ３４Ｗからなる群から選択される１以上のアミノ酸置換を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項37
請求項１から１７及び２４のいずれか１項において、ＨＣＤＲ２が、Ｓ６１Ｐ及びＡ６２Ｓからなる群から選択される１以上のアミノ酸置換を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項38
請求項１から１７及び２４のいずれか１項において、ＬＣＤＲ１が、Ｓ２４Ｑ、Ｎ３０Ｓ及びＫ３１Ｎからなる群から選択される１以上のアミノ酸置換を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項39
請求項１から１７及び２４のいずれか１項において、ＨＣＤＲ１が、Ｆ２７Ｇ、Ｌ２９Ｉ、Ｔ３０Ｓ及びＶ３４Ｗからなる群から選択される１以上のアミノ酸置換を含み、ＨＣＤＲ２が、Ｓ６１Ｐ及びＡ６２Ｓからなる群から選択される１以上のアミノ酸置換を含み、ＬＣＤＲ１が、Ｓ２４Ｑ、Ｎ３０Ｓ及びＫ３１Ｎからなる群から選択される１以上のアミノ酸置換を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項40
請求項４又は５において、ヒト抗体からの重鎖フレームワーク領域をさらに含み、前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項41
請求項４又は５において、ヒト抗体からの軽鎖フレームワーク領域をさらに含み、前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項42
請求項１５〜１７のいずれか１項において、前記重鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項43
請求項１５〜１７のいずれか１項において、前記軽鎖フレームワーク領域が１以上のマウス残基を含まない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項44
請求項１〜４３のいずれか１項において、原型の非ヒト化抗体又は原型の非ヒト化抗体からの可変領域とヒトＦｃ領域を含むキメラ抗体と同じ活性を保持している、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項45
請求項４４において、前記活性がリストセチン誘発血小板凝集活性として測定される、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項46
請求項１〜４３のいずれか１項において、エフェクター機能を有していない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項47
請求項１〜４３のいずれか１項において、ＩｇＧ４に由来するＦｃ領域を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項48
請求項１〜４３のいずれか１項において、ヒトｖＷＦのＡ１ドメインに特異的である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項49
請求項１〜４３のいずれか１項において、完全抗体である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項50
請求項１〜４３のいずれか１項において、前記結合性フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２及び二重特異性抗体からなる群から選択される抗体フラグメントである、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項51
請求項５０において、前記抗体フラグメントがＦａｂではない、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項52
請求項１〜４３のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸。
請求項53
微生物としてＤＳＭＺに寄託番号：ＤＳＭ２１０５９として寄託されたベクターＧＳ２６４の核酸配列をコードする軽鎖を含む単離核酸。
請求項54
微生物としてＤＳＭＺに寄託番号：ＤＳＭ２１０６０として寄託されたベクターＧＳ２６５の核酸配列をコードする重鎖を含む単離核酸。
請求項55
ＳＥＱＩＤＮＯ：１９で示される重鎖可変領域配列及びＳＥＱＩＤＮＯ：２８で示される軽鎖可変領域配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸。
請求項56
ＳＥＱＩＤＮＯ：２３７で示される重鎖配列及びＳＥＱＩＤＮＯ：２３８で示される軽鎖配列を含む、ｖＷＦに特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメントをコードする単離核酸。
請求項57
請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の単離核酸を含むベクター。
請求項58
請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の単離核酸又は請求項５７に記載のベクターを含む宿主細胞。
請求項59
請求項５８に記載の宿主細胞を培養して核酸を発現させ、抗体を製造することを含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメントの製造方法。
請求項60
請求項５９において、宿主細胞培養物から前記抗体を回収することをさらに含む方法。
請求項61
請求項５９において、宿主細胞培地から前記抗体を回収する方法。
請求項62
請求項５９において、前記宿主細胞を培養する前に、重鎖可変領域をコードする核酸を含むベクター及び軽鎖可変領域をコードする核酸を含むベクターによる前記宿主細胞に対する共トランスフェクションを行う方法。
請求項63
請求項１〜４３のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、製薬学的に許容し得る担体と、を含む組成物。
請求項64
請求項１〜４３のいずれか１項に記載の第１のヒト化抗体又はその結合性フラグメントと、ｖＷＦのＡ１ドメインに結合する第２の抗体と、を含む組成物。
請求項65
請求項６４において、前記第２の抗体がＡＪＷ−２００である組成物。
請求項66
被投与者におけるｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための方法であって、治療有効量の、請求項１〜４３のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその結合性フラグメントを前記被投与者に投与することを含む方法。
請求項67
請求項６６において、前記被投与者がヒトである方法。
請求項68
請求項６６において、前記ｖＷＦ媒介性障害が血栓症又は血栓疾患である方法。
請求項69
請求項６８において、前記血栓症又は血栓疾患が、心臓血管疾患又は虚血性脳卒中等の脳血管疾患である方法。
請求項70
請求項６９において、前記心臓血管疾患が、アテローム性動脈硬化、再狭窄、口峡炎、急性心筋梗塞、急性冠症候群又は糖尿病に伴う心臓血管疾患である方法。
請求項71
請求項６８において、前記血栓症又は血栓疾患が、血管炎症、静脈血栓症、鎌状赤血球病、異種移植拒絶反応、末梢血管疾患、血栓性血小板減少性紫斑症、嚢胞性繊維症、血管性認知症、レイノー病、関節リウマチ又は糖尿病である方法。
請求項72
請求項６９において、前記脳血管疾患が、血管性認知症、虚血性脳卒中又は再発性脳卒中の予防である方法。
請求項73
請求項６６〜７２のいずれか１項において、前記治療有効量が約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇである方法。
請求項74
請求項７３において、前記治療有効量が約０．００２〜約２０ｍｇ／ｋｇである方法。
請求項75
請求項７３において、前記治療有効量が約０．００２〜約１０ｍｇ／ｋｇである方法。
請求項76
請求項６６〜７５のいずれか１項において、１回又は複数回の投与によって前記治療有効量のヒト化抗体又はその結合性フラグメントを前記被投与者に投与する方法。
請求項77
請求項６６〜７５のいずれか１項において、前記治療有効量が、血小板凝集を抑制するために十分な量であり、出血の有意な臨床的徴候を引き起こすには不十分な量である方法。
請求項78
請求項６６〜７２のいずれか１項において、前記治療有効量が、出血の有意な臨床的徴候を引き起こすことなく、ＥＤ１００の約１〜約２５０倍である方法。
請求項79
請求項１〜４３のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその結合性フラグメントの薬剤としての使用であって、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを治療有効量で投与することを含む使用。
請求項80
請求項１〜４３のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその結合性フラグメントの、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを治療有効量で投与することを含むｖＷＦ媒介疾患又は障害の治療のための薬剤の調製における使用。
請求項81
請求項７９において、前記薬剤がｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するために使用される使用。
請求項82
請求項８０又は８１において、前記ｖＷＦ媒介性障害が血栓症又は血栓疾患である使用。
請求項83
請求項８２において、前記血栓疾患が、心臓血管疾患又は虚血性脳卒中等の脳血管疾患である使用。
請求項84
請求項８３において、前記心臓血管疾患が、アテローム性動脈硬化、再狭窄、口峡炎、急性心筋梗塞、急性冠症候群又は糖尿病に伴う心臓血管疾患である使用。
請求項85
請求項８２において、前記血栓血栓疾患が、血管炎症、静脈血栓症、鎌状赤血球病、異種移植拒絶反応、末梢血管疾患、血栓性血小板減少性紫斑症、嚢胞性繊維症、血管性認知症、レイノー病、関節リウマチ又は糖尿病を含む使用。
請求項86
請求項８３において、前記脳血管疾患が、血管性認知症、虚血性脳卒中又は再発性脳卒中の予防である使用。
請求項87
請求項７９〜８６のいずれか１項において、前記治療有効量が約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇである使用。
請求項88
請求項８７において、前記治療有効量が約０．００２〜約２０ｍｇ／ｋｇである使用。
請求項89
請求項８７において、前記治療有効量が約０．００２〜約１０ｍｇ／ｋｇである使用。
請求項90
請求項７９〜８９のいずれか１項において、１回又は複数回の投与によって前記治療有効量のヒト化抗体又はその結合性フラグメントを前記被投与者に投与する使用。
請求項91
請求項７９〜８９のいずれか１項において、前記治療有効量が、血小板凝集を抑制するために十分な量であり、出血の有意な臨床的徴候を引き起こすには不十分な量である使用。
請求項92
請求項７９〜８６のいずれか１項において、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを、出血の有意な臨床的徴候を引き起こすことなく、ＥＤ１００の約１〜約２５０倍の治療有効量で投与する使用。
請求項93
請求項１〜４３のいずれか１項において、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを治療有効量で投与することを含む薬剤としての使用のための、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項94
請求項１〜４３のいずれか１項において、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを治療有効量で投与することを含む、ｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するための方法における使用のための、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項95
請求項９３において、前記薬剤がｖＷＦ媒介疾患又は障害を治療するために使用される、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項96
請求項９４又は９５において、前記ｖＷＦ媒介性障害が血栓症又は血栓疾患である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項97
請求項９６において、前記血栓疾患が、心臓血管疾患又は虚血性脳卒中等の脳血管疾患である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項98
請求９７において、前記心臓血管疾患が、アテローム性動脈硬化、再狭窄、口峡炎、急性心筋梗塞、急性冠症候群又は糖尿病に伴う心臓血管疾患である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項99
請求項９６において、前記血栓血栓疾患が、血管炎症、静脈血栓症、鎌状赤血球病、異種移植拒絶反応、末梢血管疾患、血栓性血小板減少性紫斑症、嚢胞性繊維症、血管性認知症、レイノー病、関節リウマチ又は糖尿病を含む、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項100
請求項９７において、前記脳血管疾患が、血管性認知症、虚血性脳卒中又は再発性脳卒中の予防である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項101
請求項９３〜１００のいずれか１項において、前記治療有効量が約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇである、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項102
請求項１０１において、前記治療有効量が約０．００２〜約２０ｍｇ／ｋｇである、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項103
請求項１０１において、前記治療有効量が約０．００２〜約１０ｍｇ／ｋｇである、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項104
請求項９３〜１０３のいずれか１項において、１回又は複数回の投与によって前記治療有効量のヒト化抗体又はその結合性フラグメントを前記被投与者に投与する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項105
請求項９３〜１０３のいずれか１項において、前記治療有効量が、血小板凝集を抑制するために十分な量であり、出血の有意な臨床的徴候を引き起こすには不十分な量である、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項106
請求項９３〜１００のいずれか１項において、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを、出血の臨床的徴候を引き起こすことなく、ＥＤ１００の約１〜約２５０倍の治療有効量で投与する、ヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項107
出血の臨床的徴候を引き起こすことなく、ＥＤ１００の１〜約２５０倍の治療有効量で投与することができる、ヒトフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）に特異的なヒト化抗体又はその結合性フラグメント。
請求項108
請求項１０７において、ヒトｖＷＦのＡ１ドメインに特異的である、ヒト抗体又はその結合性フラグメント。
請求項109
請求項１〜４３のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその結合性フラグメントを、投与を必要とする被投与者に投与するための方法であって、有意な出血の臨床的徴候を引き起こすことなく、血小板凝集を抑制するために十分な治療有効量の前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを投与することを含む方法。
請求項110
請求項６６〜１０９のいずれか１項において、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを皮下投与する方法。
請求項111
請求項６６〜１０９のいずれか１項において、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを静脈内投与する方法。
請求項112
請求項６６〜１０９のいずれか１項において、射線治療と組み合わせて、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを静脈内投与する方法。
請求項113
請求項６６〜１０９のいずれか１項において、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントの前記治療有効量が、ＥＤ１００の約１〜約２５０倍である方法。
請求項114
請求項７９において、前記ヒト化抗体又はその結合性フラグメントを、ＥＤ１００の約１〜約２５０倍の量で投与する方法。
請求項115
ｖＷＦ媒介疾患又は障害の治療のための、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の第１のヒト化抗体又はその結合性フラグメントを含む製品。
請求項116
ｖＷＦ媒介疾患又は障害の治療のための、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の第１のヒト化抗体又はその結合性フラグメントを含むキット。
請求項117
請求項１〜４３のいずれか１項に記載のヒト化抗体又はその結合性フラグメントの非治療用途における使用。
請求項118
請求項１１７において、前記非治療用途が診断検定である方法。